lunes, 8 de octubre de 2012
sábado, 6 de octubre de 2012
ELECTROFORESIS
Electroforesis
León S. C. E. 3er semestre Biología celular
Lic.
En Biología ITCA
Resumen:
En 1937 el bioquímico sueco
Arne Tiselius descubrió la electroforesis. Técnica para la separación de
moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico. La separación
puede realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte sólido (p. ej.,
electroforesis en papel o en acetato de celulosa), o bien a través de una
matriz porosa (electroforesis en gel), o bien en disolución (electroforesis
libre). Dependiendo de la técnica que se use, la separación obedece en distinta
medida a la carga eléctrica de las moléculas y a su masa. http://es.wikipedia.org/wiki/Electroforesis
Palabras claves: fricción,
energía cinética, potencial de corriente, corrida electroforética.
Fundamento:
El movimiento de las
moléculas está gobernado también por dos fuerzas adicionales; la fricción y la
energía cinética La suma de todas estas fuerzas provoca que las moléculas no
migren de una manera homogénea, de tal manera que, si las moléculas son
colocadas en un cierto lugar de solución, los iones comenzaran a moverse
formando un frente cuya anchura aumentara con el tiempo.
Para reducir la anchura de
este frente se reduce el movimiento de las moléculas empleando un medio que le
oponga resistencia, un gel. Éste es un polímero soluble de muy alto peso
molecular que atrapa moléculas de agua y forma un tamiz que dificulta el movimiento de los solutos,
consecuentemente, la migración electroforética de las moléculas será más lenta,
pero el ensanchamiento del frente se verá reducido también. Se aplica un
potencial de corriente continua a través del mismo durante un tiempo fijo.
Cuando las separaciones se han completado se interrumpe el paso de corriente y
las especies separadas se tiñen para visualizarse.
Http://www.labnano.org.mx/esp%20electroforesis.htm
Metodología:
Una electroforesis típica
consiste de los siguientes pasos:
1. Preparar un gel de
agarosa a la concentración requerida
2. Mezclar las muestras a
analizar con un amortiguador adecuado y un colorante (azul de bromofenol) el
cual indica el frente de corrida de la electroforesis
3. Montar las muestras en el
gel
4. Realizar la corrida
electroforética
5. Visualizar los ácidos
nucleicos.
Usos: determinar los tamaños
moleculares de ácidos nucleicos, analizar los fragmentos cortados con enzimas
de restricción, comparar los tamaños entre sí de distintos tipos de ADN y
aislamiento y recuperación de fragmentos de ADN purificados. http://www.vivo.colostate.edu/hbooks/genetics/biotech/gels/principles.html
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